细胞治疗里活性得以维持存在核心难点对而言，将发生在细胞于体外进行培养之际，针对CO₂浓度展现出高度敏感性情况，正常细胞在代谢进程中则会生成乳酸，因乳酸产生致使培养基的pH值出现下降势头，然而CO₂需要借助与培养基里碳酸氢盐缓冲体系像NaHCO₃展开反应，此反应过程为CO₂+H₂O⇌H₂CO₃⇌H⁺+HCO₃⁻，以此来维护pH的稳定。若CO₂浓度低于4%，缓冲体系失衡，会致使pH值升至7.6以上，细胞酶活性受抑制，并使增殖速率下降30%；若浓度高于6%，则pH值降至7.2以下，会造成细胞渗透压紊乱，进而出现皱缩、凋亡，特别是T细胞、间充质干细胞这类对微环境敏感的细胞，若浓度波动1%，即会导致存活率下降10%-15%，普通培养设备（像开放式生物安全柜），因CO₂浓度受外界气流影响（波动范围2%-8%），终究难以满足细胞治疗对活性的要求。

    5%CO₂浓度是细胞存活率≥95%的关键所在，这来源于它对不同细胞类型代谢需求的适配：T细胞（常用于干细胞治疗）在5%CO₂环境的情况下，IL-2分泌量相较于4%浓度时要高25%，细胞活化率从80%提升至92%，经过48小时的培养,存活率可达到96%-98%（当低于此浓度时，存活率会降至85%以下，并且效应细胞杀伤活性变小）；间充质干细胞（用来进行组织修复治疗）在5%CO₂的环境下，成骨分化的标志物（比如碱性磷酸酶）表达量会提高30%，细胞贴壁率即达到95%，在传代3次后依然能保持80%以上的多向分化能力（当浓度偏离时，贴壁率会降低至70%，分化能力会明显变弱）；在CAR-T细胞的制备过程中，5%CO₂能够减少细胞因子释放综合征（CRS）相关细胞（像单核细胞）的异常激活，使得终产品里面活性CAR-T细胞的占比≥90%，从而符合临床输注的要求。

    为保证CO₂浓度达到恒定效果，隔离器要配合以下这些实操要点：其一，对于培养基适配，要选择与5%CO₂相匹配的碳酸氢盐浓度培养基，像含有2.2g/LNaHCO₃的DMEM培养基、含有1.5g/LNaHCO₃的RPMI-1640培养基等，防止因培养基缓冲能力欠缺致使pH出现波动；其二，关于浓度校准，每周运用便携式CO₂分析仪，其精度为±0.05%且经过国家计量认证，来对隔离器传感器进行校准，要是偏差超过0.1%就需要重新标定，标定方法是通入浓度已知的5%标准CO₂气体，等传感器读数稳定后调整到标准值；其三，在样本放置方面，细胞培养皿/培养瓶要均匀分布在腔体载物台，载物台配有恒温加热模块，温度是37±0.5℃，避免堆叠从而遮挡气流循环，气流死角处CO₂浓度偏差有可能达到0.5%；其四，针对开门控制，每次取放样本都要先关闭CO₂补充阀，开门时间要≤30秒，开门1分钟会让浓度下降0.8%-1.2%，关门后系统会启动“快速补浓模式”，3分钟内将浓度恢复到5%。

    细胞存活率受异常情况处理的直接影响：若钢瓶压力表显示CO₂钢瓶压力低于0.5MPa，要立即更换新钢瓶，更换时关闭隔离器总电源以避免空气渗入，更换后通气10分钟再检测浓度；若传感器故障致使浓度显示异常，可切换至备用传感器，因隔离器配备双传感器冗余设计，同时联系厂家维修，期间每30分钟用便携式分析仪手动检测1次；若腔体密封失效比如门密封条老化，会出现浓度持续下降而且补浓无效，需停机更换密封条，密封条材质是硅橡胶且硬度50±5ShoreA，更换后需做漏风测试，通入5.5%CO₂，30分钟内浓度下降≤0.1%则为合格。

    经由“5%CO₂浓度始终保持不变+与之配套的实操有着规范要求”，隔离器能够把细胞治疗里关键细胞的存活比率稳定维持在95%之上，防止因浓度出现波动致使样本被报废（单批次CAR-T细胞制备成本超过50万元，存活率不符合标准会直接造成全额损失），与此同时契合GMPAnnex1针对细胞培养微环境所提出的要求（需要记录CO₂浓度、温度、湿度等参数，保存期限≥5年），给细胞治疗产品的临床安全性以及有效性给予核心保障。